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ATCC細胞株解凍和培養(yǎng)操作

更新時間:2017-07-18      點擊次數(shù):1903
   ATCC細胞株解凍和培養(yǎng)操作
  凍存的ATCC細胞株和雜交腐細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到細胞后,可以立即解凍復(fù)蘇,去除二甲基亞砜(DSMO0)后進行細胞培養(yǎng)。如果不立即復(fù)蘇培養(yǎng)細胞,必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲存。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低,達不到-130℃,細胞活力會立即下降。
  ATCC細胞株產(chǎn)品附帶一份產(chǎn)品資料單,其中包含細胞株的信息和詳細的操作指南。細胞株的所有詳細介紹可以在ATCC找到 ,產(chǎn)品資料單也可以在ATCC下載。此外產(chǎn)品還附帶細胞株具體生產(chǎn)批次的檢測報告,其中包含批次的特定信息,如每只凍存管中細胞的數(shù)量,無微生物污染的檢測結(jié)果等。
  操作推薦
  ATCC推薦在操作凍存的ATCC細胞株時使用手套,工作服和防護面具以避免任何事故發(fā)生。檢查包裝,查看是否有任何事破綻或滲漏。東側(cè)的ATCC細胞株應(yīng)處于固體狀。
  將凍存的ATCC細胞株從有干冰的包裝中取出,理解復(fù)蘇培養(yǎng),或迅速轉(zhuǎn)移放置在液氧罐氣相層在——130°C以下的度存儲。
  1、 先準備好細胞培養(yǎng)皿或細胞株培養(yǎng)瓶,及產(chǎn)品說明推薦的相應(yīng)細胞培養(yǎng)基。并在37°c水浴中預(yù)先溫熱細胞培養(yǎng)基
  2、小心取出裝有細胞的凍存管,保持管蓋擰緊,將凍存管蓋一下的部分置于37°C水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應(yīng)該盡快,大約短于2分鐘或待zui后一塊小冰晶體剛?cè)诨蛻?yīng)該將細胞凍存管取出水浴。
  3、在從水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑,用于菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應(yīng)該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴格操作。
  4、小心擰干凍存管的頂部,將管內(nèi)容物用1MI移槍轉(zhuǎn)移到9毫升培養(yǎng)基的無菌離心管中。離心5到7分鐘(125*g).小心吸去上清液以去除抗凍劑(二甲基亞砜),避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的*培養(yǎng)基中。將細胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器,輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長較慢的細胞株可重懸于5——8mI培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T125培養(yǎng)瓶。生長較快的細胞株可重懸于12——20mI培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶。
  5、將細胞培養(yǎng)容器置于細胞培養(yǎng)箱,在溫度37°C二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進行卵育。細胞培養(yǎng)24小時候后應(yīng)在顯微鏡下觀察細胞株形態(tài)和生長狀況 。
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