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ATCC菌種的孢子分離法

更新時(shí)間:2017-12-26      點(diǎn)擊次數(shù):2010
   ATCC菌種的孢子分離法
  ATCC菌種是從事微生物學(xué)及生命科學(xué)研究的基本材料,在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中,診斷制品的制備,菌苗的生產(chǎn)、微生物致病性研究,藥物的抑菌試驗(yàn)及藥品微生物檢驗(yàn)等都有一套完整的菌種菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。
  工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩,挑選具有某種能力的有用菌種。菌種的分離就是首先是從土壤或腐生植物中收集含菌樣品,用無菌水稀釋后,涂布于置有適宜細(xì)菌、放線菌或霉菌生長的瓊脂培養(yǎng)基平皿上,并將其倒置于恒溫箱中,培養(yǎng)一定時(shí)間,平皿上長出的許多單個(gè)菌落(單一微生物的集落)經(jīng)分別分離后即為各種純種菌株,簡稱純種,移種至試管斜面培養(yǎng)基上,置4℃冰箱備用。
  ATCC菌種的孢子分離法:
  孢子分離法又可分為以下幾種方法:
  ( 1 )褶上涂抹法:選取新鮮、健壯、未開傘、未破裂的子實(shí)體,洗凈后用0 . 1 %升汞或75 %酒精表面滅菌2 分鐘,然后連同培養(yǎng)基一起放入接種箱內(nèi),經(jīng)福爾馬林熏蒸消毒12 ~ 24 小時(shí),再按無菌操作技術(shù)將接種環(huán)在子實(shí)體菌褶上涂抹,把涂抹后帶孢子的接種環(huán)在培養(yǎng)基上劃線接種,,zui后置于25 ~ 28 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng),可得純菌種。
  ( 2 )孢子印采集法:取滅過菌的載玻片、試紙或黑布,置于新鮮、未開傘或未開裂的子體菌褶的下方。經(jīng)24 小時(shí)后,便落下孢子,形成印痕(即孢子印)。然后,用接種環(huán)或玻璃棒蘸取孢子,接種在平面或斜面培養(yǎng)基上,進(jìn)行恒溫培養(yǎng),可得純菌種。
  ( 3 )孢子收集器采集法:孢子收集器由玻璃鐘罩、培養(yǎng)皿、三角架、搪瓷盤等組成。鐘罩下為一搪瓷盤,直徑25 厘米左右,盤內(nèi)先墊襯4~6 層紗布,中央放1 副9 厘米直徑的培養(yǎng)皿,大蓋口朝下,上放小的,口向上。然后,在上面小的培養(yǎng)皿上放1 只鉛絲繞成的三角架,再將帶孔的玻璃鐘罩蓋上,頂上罩孔用棉塞塞好,zui后,用紗布包好整個(gè)孢子收集器,置于高壓滅菌鍋或蒸籠內(nèi)滅菌2小時(shí)。
  孢子收集器滅菌消毒后,放入無菌室或無菌箱內(nèi)。然后,用小刀割取1 塊4~5 厘米大小的子實(shí)體,插在收集器內(nèi)的三角架頂上(若無孢子收集器,也可用培養(yǎng)皿代替)。再置于溫度24 ~26 ℃下培養(yǎng)24 小時(shí),培養(yǎng)皿中便可見到白色粉狀物,此即為孢子。此時(shí),可將孢子收集器再移至接種箱內(nèi),取出培養(yǎng)皿,蓋好,并在培養(yǎng)皿內(nèi)加入10 ~ 20 毫升的無菌水,使孢子散于本中,成為孢子懸浮液。然后,再用無菌打針筒或吸管吸取孢子懸浮液,接種于試管斜面培養(yǎng)基上,每管注2 ~ 3 滴。置于24 ~ 26 ℃溫度下培養(yǎng)5 ~ 7 天,培養(yǎng)基上便可長出白色菌落。待菌落直徑有0 . 5 厘米時(shí),選健壯的菌落,再移接于另一試管的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)。當(dāng)白色菌絲長滿試管時(shí),便得純菌種。
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