ATCC細胞株一般使用蛋白水解酶(比如胰蛋白酶)消化貼壁細胞成單個細胞,也可加入乙二胺四乙酸(EDTA)提高消化能力,EDTA 是一種二價離子的螯合劑,能抑制細胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA,一般用不含Ca2+和Mg2+的鹽溶液配置,先用胰酶-EDTA 消化液清洗細胞(5.0 -10.0 ml/75cm),然后棄去消化液,重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask) ,觀察ATCC細胞株直到細胞變圓脫離瓶壁,此過程一般需要5-15分鐘,為了避免細胞成團,消化細胞的過程中不要拍打細胞瓶。對于特別難消化的細胞,可以加入胰酶EDTA 消化液后把細胞置于37°C 促進消化,ATCC細胞株脫離瓶壁后,立刻加入含有血清的*培養(yǎng)基中止消化,血清中某些蛋白質(zhì)能夠抑制胰酶的活性。
ATCC細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為細胞株,也就是說,細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。
原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代,或傳代次數(shù)有限, 可稱為有限細胞系,如可以連續(xù)培養(yǎng), 則稱為連續(xù)細胞系,培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。 所以細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講,可培養(yǎng)到40-50代。細胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。對于人類腫瘤細胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長穩(wěn)定,并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。
原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,細胞的生長就會出現(xiàn)停滯,大部分細胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機”而繼續(xù)傳下去,這些存活的細胞一般能夠傳到40--50代,這種傳代細胞叫做細胞株。細胞株的遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變。當(dāng)細胞傳至50代以后又會出現(xiàn)“危機”,不能再傳下去。但是有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變,并且?guī)в邪┳兊奶攸c,有可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去,這種傳代細胞稱為細胞系。在一些別的資料中,細胞株和細胞系的概念與我們教材上的說法正好相反。課標(biāo)教材沒有再介紹這一對概念。這又是為什么呢?人教社編輯包春瑩老師(bcying)對這一疑點的解釋:細胞系和細胞株,兩者曾一度混用,導(dǎo)致有些文獻中概念不清。下面所指的概念是現(xiàn)在國內(nèi)外比較通用的,也是絕大多數(shù)研究者接受的觀點。
原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功即稱為細胞系(CellLine),因此細胞系可泛指一般可能傳代的細胞。其中能夠連續(xù)傳代的細胞叫做連續(xù)細胞系或無限細胞系,不能連續(xù)培養(yǎng)的稱為有限細胞系。大多數(shù)二倍體細胞為有限細胞系。通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為細胞株(CellStrain),也就是說,細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。